Eucalyptus saligna y Eucalyptus citriodora (página 2)

Enviado por Dr.C. Guillermo Barreto Argilagos

Partes: 1, 2

RESULTADOS

La infusión 9 y la decocción 10 de
E. saligna (140 mg/mL y 70 mg/mL, respectivamente)
fueron las de mayor efecto inhibitorio en la viabilidad de las
cepas estudiadas (Tabla 3). Sin embargo, el análisis estadístico efectuado, puso
de manifiesto que los extractos 3 (decocción, 140 mg/mL) y
5 (extracto acuoso, 140 mg/mL) de E. saligna tienen
un efecto similar (Tabla 4).

En el ensayo
preliminar, efectuado para establecer la acción
inhibitoria de los extractos sobre la expresión del factor
de colonización fibrilar K88, se constató un
resultado positivo en 1; 4; 6; 7 y 8; dudoso para 2 y 10, por la
aparición de cepas autoglutinantes; y negativo para 3; 5 y
9 (Tabla 5).

El ensayo
definitivo, realizado con los extractos que tenían
acción bloqueadora positiva (y dudosa) sobre la
expresión de K88, demostró un mayor efecto de la
decocción (6; 17,5 mg/mL) e infusión (7; 8,75
mg/mL) de E. saligna, seguidos de la
decocción de E. citriodora (1, 70 mg/mL). La
presencia de variantes autoaglutinantes enmascaró los
restantes resultados (Tabla 6).

Todos los extractos inhibidores de K88, también
lo fueron del factor CFA/I que además, resultó
inhibido por el extracto 10, a diferencia de K88 (Tabla 6). En
las experiencias efectuadas con la cepa portadora de CFA/I, no se
observaron variantes autoaglutinantes.

Los ensayos de
ELISA, efectuados con las variantes autoaglutinantes, demostraron
la ausencia total de K88 en la variantes tratadas con el extracto
acuoso de E. citriodora (4). En los restantes casos los
resultados no son concluyentes, dada la imposibilidad de realizar
este ensayo a todas las variantes autoaglutinantes (Tabla
7).

Las principales acciones de
los extractos sobre E. coli G7 se resumen en las Tablas 8
y 9.

DISCUSIÓN

En la investigación realizada sólo algunos
extractos elaborados a partir de E. saligna afectaron la
viabilidad de las cepas tratadas (Tabla 3). Su efecto inhibidor
estuvo proporcionalmente relacionado con la concentración
(Tabla 4). Este es un resultado que ha sido muy contradictorio en
trabajos precedentes. Roig (1974) refiere la acción
antimicrobiana del Eucalyptus. Sus resultados se concretan
a experiencias efectuadas a partir de hojas de esta planta.
Dellacassa et al. (1989) efectuaron un estudio que
abarcó 17 especies de Eucalyptus. En el mismo
constataron una acción diferencial sobre la viabilidad
bacteriana que estaba condicionada tanto por la especie de
Eucalyptus, como de las bacterias
estudiadas. Esta investigación se limitó
también a los aceites esenciales obtenidos de hojas de
Eucalyptus.

Barreto et al. (1995b) demostraron la
acción bactericida in vitro de tinturas elaboradas
de corteza Eucalyptus sobre cepas de Pseudomonas
aeruginosa polirresistentes en las que la acción
bactericida no era debida al alcohol
presente en los extractos y sí a su capacidad de
extracción de los metabolitos (o metabolito) responsables
del efecto bactericida. Los estudios relativos a la acción
antibacteriana de decocciones, infusiones y extractos acuosos de
la corteza de esta planta son muy escasos y no coincidentes.
Bertha Velázquez et al. (1989) por primera vez,
establecieron la acción de decocciones de cortezas de
Eucalyptus en el tratamiento de diarreas
agudas debidas a ECET. Este colectivo no encontró efectos
bactericidas en las decocciones utilizadas. Posteriormente,
Barreto et al. (1993a), establecieron la acción
inhibitoria de estos extractos en la expresión de los
factores fibrilares de colonización K88 y K99, sin que se
afectara la viabilidad bacteriana.

Resultados similares, en lo referente a la no
afectación del crecimiento
bacteriano, reportaron Barreto et al. (1993b). En
estos trabajos no se identificó la especie de
Eucalyptus utilizada. Más adelante se pudo precisar
que se trataba de hibridaciones en que no participaban E.
saligna y E. citriodora (Misleidi Martín et
al., 1993; Barreto et al., 1995a). Los resultados del
presente estudio, ponen de manifiesto la participación de
3 factores en el fenómeno analizado: a) especie de
Eucalyptus, b) concentración del extracto y c) cepa
bacteriana. El método de
extracción, en las condiciones de esta
investigación, no influyó (Tablas 3 y
4).

En los tamizajes fitoquímicos efectuados a E.
saligna (Yadila Gómez et al., 1994) y E.
citriodora (Mayra Castells et al., 1994) se ha
constatado la presencia de taninos, flavonoides y quinonas, tanto
en las decocciones como en los macerados acuosos. Estos
metabolitos, teniendo en cuenta lo reportado por Cuellar (1983)
pueden estar vinculados con los efectos sobre viabilidad
anteriormente analizados.

La acción de los extractos sobre la
expresión del factor de colonización K88, en la
experiencia preliminar, demostró un efecto inhibitorio
ante la decocción (1) y el extracto acuoso (4) de E.
citriodora, y las decocciones (6 y 7) e infusión (8)
de E. saligna. Los restantes extractos promovieron
autoaglutinaciones o no inhibieron la expresión de K88
(Tabla 5).

Tanto en esta experiencia preliminar como en la
definitiva (Tablas 5 y 6) se pudo comprobar que todos los
extractos elaborados a partir de E. citriodora
inhibían la expresión de la fimbria K88. Con los
extractos de E. saligna sólo se logró este
efecto en los de concentraciones inferiores a 21 mg/mL, siendo
máximo en la decocción (6) e infusión (7)
(Tabla 6). Este aspecto se analizará más
adelante.

Todos los extractos con acción inhibitoria sobre
K88, también bloquearon la expresión de CFA/I,
además del 10, que sólo reprimió a este
último pues, debido a las autoaglutinaciones su resultado
sobre K88, hasta este momento de la investigación, se toma
como negativo (Tabla 6). El factor de colonización I
(CFA/I) es de los más frecuentes en ECET que afectan al
humano. Posee un alto contenido de aminoácidos
hidrofóbicos que le confieren a la bacteria una elevada
hidrofobicidad superficial. Blanco y Blanco (1993) describen esta
fimbria con un patrón de hemoaglutinación manosa
resistente frente a hematíes humanos, de terneros y de
pollos; de allí, la elección de los primeros para
evaluar la posible acción inhibitoria de los extractos en
su expresión. Como se trata de una cepa salvaje, no de
referencia, su estudio es sólo preliminar. Por ello, no se
realizaron réplicas, como en las investigaciones
en que estuvo involucrada la cepa G7 que, además de ser
una cepa de referencia, ha estado
involucrada en los estudios anteriores sobre esta
temática.

La inhibición de los factores de
colonización, ha sido una opción investigada en
E. coli asociadas a infecciones del tracto urinario
(UTIEC). Al respecto, se han utilizado concentraciones subletales
de antibióticos (Padilla et al., 1988; Padilla,
1991). Prieto et al. (1995) inhibieron la expresión
de la fimbria P con extractos de Lepidium virginicum.
Barreto et al. (1998) lograron efectos similares con
tinturas de Achirantes aspera. En P. aeruginosa
también se han obtenido resultados semejantes mediante la
utilización de quinolonas en concentraciones subletales
(Nobile et al., 1992). Barreto et al. (1994)
lograron la inhibición de la expresión de la
fimbria K88 de E. coli G7 mediante el uso de
aminoglucósidos en concentraciones subletales.
Concentraciones de sodio, a partir de 40 g/L, estimulan la
formación de una seudocápsula en cepas de E.
coli uropatógenas que recubre sus fimbrias, inhibiendo
así su contacto con los receptores de eritrocitos y
células
uroepiteliales (Padilla, 1989).

Misleidi Martín et al. (1993) concluyeron
que los extractos de E. saligna no inhibían la
expresión de K88. Este colectivo utilizó extracto
acuoso e infusión, ambos con una concentración de
70 mg/mL. En el presente trabajo se
constató que, aún a concentraciones de 21 mg/mL,
tampoco se produce este efecto que, en el caso de las infusiones,
tiene lugar a concentraciones menores o iguales a 17,5 mg/mL
(Tablas 8 y 9). Niurka Sóñora et al. (1992),
no lograron inhibir la expresión de esta adhesina
utlizando decocciones de Eucalyptus, en tanto que Barreto
et al. (1993) sí. En ambos casos no se precisa la
especie de Eucalyptus utilizada.

Barreto et al. (1993a) reportaron inhibiciones de
la fimbria K88 de E. coli G7 frente a extractos de
Achirantes aspera. Este colectivo (1995) había
obtenido efectos similares con extractos de E. citriodora,
no así con los efectuados a partir de E. saligna.
En todas estas experiencias estuvo presente la cepa E.
coli G7. Los resultados obtenidos posibilitan establecer que
en la inhibición de K88 influyen: a) la especie de
Eucalyptus y b) la concentración de extractos. No
existen elementos para asegurar que el método de
extracción tenga influencia.

La aparición de variables
autoaglutinantes, inducidas por el tratamiento con los extractos,
constituyó un elemento enmascarador de los resultados de
experiencias precedentes (Misleidi Martín et al.,
1993; Barreto et al. 1995a), así como de
ésta. La imposibilidad de utilizar técnicas
de miscroscopia electrónica, obligó a una
confrontación de las variantes autoaglutinantes frente a
un ELISA tipo Sandwich. Los resultados obtenidos evidenciaron la
pérdida de K88 en todas las variantes

autoaglutinantes ensayadas (Tabla 7). Estos resultados,
tienen un valor
comparable al logrado con la microscopia electrónica ya
que el AcM 11/70 detecta la subunidad FaeG, que constituye el
componente principal de la fimbria K88 y, al mismo tiempo,
comprende su elemento de adhesión (Kusters y Gaastra,
1994; Mol y Oudega, 1996).

El bloqueo de la expresión de la fimbria K88
puede deberse a una infinidad de causas que van, desde la
represión del operón fae, hasta el bloqueo de los
distintos sistemas
enzimáticos vinculados con la transportación y
ensamblaje de las subunidades que conforman la fimbria K88. En
tal sentido, al igual que ocurre con los antibióticos
bloqueadores de la síntesis
proteica utilizados en concentraciones subletales, en los
extractos analizados, deben estar presentes metabolitos que
actúen de forma similar. Este es un aspecto por dilucidar
en investigaciones posteriores; los flavonoides, quinonas y
taninos, detectados en los tamizajes fitoqímicos
realizados a las cortezas de estas plantas,
constituyen opciones a valorar (Barreto et al., 2005).

La autoaglutinación es un fenómeno que, en
bacterias gramnegativas, ocurre cuando se pierden las unidades
repetidoras de monosacáridos de la envoltura externa
(Tayot et al., 1981). Los flavonoides tienden a combinarse
con diversos monosacáridos (Cuéllar, 1983) por
ello, y teniendo en cuenta que están presentes en la
corteza de las especies investigadas (Mayra Castells et
al., 1994; Yadila Gómez et al., 1994) se puede
inferir, como hipótesis, su participación en la
formación de variantes autoaglutinantes.

Existe otra causa de autoaglutinación. La
aglutinación se lleva a cabo en un medio salino donde la
concentración óptima de electrólitos es 0,15
mol. Concentraciones mayores pueden neutralizar las cargas
superficiales, que las bacterias y otros antígenos particulados poseen en su
superficie a un pH neutro, y
provocar aglutinación espontánea no
específica (Margni, 1982).

Bertha Velázquez et al. (1989)
establecieron que, una de las ventajas de los extractos de
Eucalyptus usados como antidiarreicos, era su capacidad de
restituir electrólitos perdidos en este síndrome
multifactorial, por lo que, no se puede descartar su influencia
en la aparición frecuente de cepas autoaglutionantes luego
de su contacto con estos extractos. Este colectivo
estableció la presencia de iones sodio y potasio en
decocciones de corteza de esta planta. Se ha podido comprobar que
el ion potasio estimula la adhesión bacteriana a sus
receptores celulares (Vaca et al., 1989) en tanto que el
sodio, como ya se mencionó, en altas concentraciones,
induce la formación de seudocápsulas (Padilla,
1989). Es preciso profundizar en cuanto a la acción de
estos dos iones a diferentes concentraciones

para poder definir
su verdadero rol en el fenómeno analizado aunque, en el
caso del sodio, nunca estaría en una concentración
tan elevada que propiciara la producción de
seudocápsulas.

La Tabla 8 recoge las principales acciones de los
extractos investigados sobre la viabilidad y expresión de
K88 en la cepa E. coli G7. En la misma se hacen
correcciones a los valores
del efecto inhibidor de K88 de extractos acuosos de E.
citriodora, afectados por las autoaglutinaciones (Tabla
7). Esta tabla y la 9 constituyen una integración resumida de los resultados
obtenidos en el presente trabajo, y brindan los elementos
esenciales que han motivado las contradicciones en cuanto al
efecto de extractos de Eucalyptus sobre la viabilidad y la
expresión de K88 en E. coli G7 en los trabajos
precedentes. Al mismo tiempo, señalan los aspectos
aún pendientes de estudio.

Los resultados obtenidos en esta investigación,
establecen las bases para la terapia de EDA debidas a ECET
portadoras del factor de colonización K88 mediante 2
opciones:

– La forma convencional, que se sustenta en la
acción de aquellos extractos que afectan la viabilidad de
ECET.

– La inhibición del factor de colonización
fibrilar K88, bloqueando así el primer paso en el
desencadenamiento de esta etiología.

El estudio preliminar efectuado con la cepa E.
coli 158 portadora de CFA/I, ofrece perspectivas semejantes,
aunque es preciso estudiarla con el mismo rigor. Finalmente, dada
la similitud existente entre ECET y V. cholerae, en cuanto
a mecanismo de infección (Jones y Freter, 1976) y sus
toxinas termolábiles (Tayot et al., 1981),
así como el notable efecto de varios de los extractos
sobre la viabilidad de esta especie bacteriana (datos no
contemplados en este estudio) convierten a los mismos en opciones
a considerar en el tratamiento del cólera,
enfermedad que en las postrimerías del siglo XX
regresó con nuevos bríos a cobrar vidas
humanas.

CONCLUSIONES

El estudio efectuado con diversos extractos a partir de
E. citriodora y E. saligna, permiten concluir lo
siguiente:

• Su efecto sobre la viabilidad bacteriana depende
de la especie de Eucalyptus, la concentración de
los extractos y la especie o variedad bacteriana de que se
trate.

• El efecto inhibitorio sobre el factor fibrilar
K88 depende de: la especie de Eucalyptus y la
concentración de los extractos.

• Todos los extractos que afectaron la
expresión de K88 también inhibieron a
CFA/I.

• En las variantes autoaglutinantes analizadas no
estaba presente la fimbria K88.

RECOMENDACIONES

• Hacer extensivo este estudio a otras especies de
Eucalyptus.

• Determinar la participación de
flavonoides, taninos y quinonas, en los efectos sobre la
viabilidad e inhibición de K88 constatados.

• Determinar la presencia de iones
inorgánicos en los extractos evaluados con acción
sobre K88. Evaluar la acción del ion sodio en este
efecto.

• Establecer las concentraciones mínimas
inhibitorias (CMI) de la viabilidad y la expresión de K88
de los extractos investigados, in vitro e in vivo.

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